11例单细胞转录组测序分析

一、服务清单：完成11例小鼠的单细胞转录组建库测序和个性化分析；每个样本交付原始数据量不低于100G，需包含2种文库信息：单细胞3端转录组+糖基化文库信息，并且目标捕获细胞数≥10000个。 1. 合同签订后1天内，可提供保存效果长达72h的组织保存液； 2. 样本接收后2天内，可完成样本质检； 3. 样本接收后14个工作日内，完成单细胞捕获、单细胞3端转录组+糖基化文库构建和测序等实验。 4. 服务范围：样本质检、单细胞3端转录组+糖基化文库和测序、实验经过汇报、项目结题报告。 二、服务要求： 1、样本处理要求：响应供应商应提供组织样本的保存试剂，保证样本离体72h后的稳定性，并能够用于后续单细胞悬液的制备。可提供组织解离试剂，独立完成对采购人寄送的样本进行单细胞悬液的制备。响应供应商具备成功解离皮肤肿瘤等难解离样本的能力，可完成单细胞悬液的质检，解离后的单细胞悬液QC：① 细胞活率＞90%；② 细胞结团率＜10%；③ 活细胞浓度范围：在700 ~ 1200cells/μl之间，悬液体积>100ul；④ 有核率＞70%；⑤ 细胞直径范围：在5~70μm之间，可包含多种细胞类型；⑥ 不存在逆转录抑制剂和非细胞的核酸分子。制备的单细胞悬液满足后续的单细胞捕获和建库需求。 2、单细胞分离标记：供应商基于微孔芯片泊松分布捕获单细胞原理，匹配单细胞捕获仪器或者人工操作完成单细胞悬液的分离标记，满足后续构建测序文库。 3、测序文库构建：响应供应商提供单细胞3端转录组以及糖基化捕获建库试剂盒，可用单细胞悬液构建带标签的转录组和糖基化测序文库，可以满足不同样本的建库需求。构建好的文库进行文库质量检测，测序文库QC：cDNA浓度≥1ng/μl，文库浓度≥3ng/μl，cDNA主峰长度应大于750bp，文库长度分布在350bp-700bp之间。对符合标准的文库进行后续的上机。 4、***平台：用高通量测序兼容Illunima和MGI***平台，测序策略PE150。 测序质量要求： Q20＞95%， Q30＞90%， 碱基类型分布均匀。 5、 测序数据量：单细胞转录组文库提供≥100Gb raw data，目标捕获细胞数≥10000个细胞/样本，测序质量要求：Q20＞95%，Q30＞90%，碱基类型分布均匀，采用严格的数据质控标准，保证数据质量。 6、提***平台免费服务和使用，有效期以合同为准。 7、供应商需具有完整的组织解离仪、组织解离液、组织保存液、自有品牌的单细胞捕获仪器等原创性技术。

一、验收标准： 1、单细胞悬液QC：① 细胞活率＞90%；② 细胞结团率＜10%；③ 活细胞浓度范围：在700 ~ 1200cells/μl之间，悬液体积>100ul；④ 有核率＞70%；⑤ 细胞直径范围：在5~70μm之间； 2、测序文库QC：cDNA浓度≥1ng/μl，文库浓度≥3ng/μl，cDNA主峰长度应大于750bp，文库长度分布在350bp-700bp之间； 3、测序数据量：单细胞转录组文库提供≥100Gb raw data，目标捕获细胞数≥10000个细胞/样本，测序质量要求：Q20＞95%，Q30＞90%，碱基类型分布均匀。 二、服务承诺： 验收合格后提供一年的售后服务，提供技术分析支持。 在项目竞价阶段提供项目服务承诺函（竞价投标时，请提供加盖投标单位公章的服务承诺函扫描件作为响应材料，承诺函格式自定）。