结直肠癌肝转移ctDNA数字PCR检测

一、（委托任务）内容、方式和要求： 1．（委托任务）内容： 基于采购人承担的消化道肿瘤科研项目需求，采购人委托中标人利用微滴式数字PCR（ddPCR）技术，开展针对结直肠癌肝转移（CRLM）患者外周血游离DNA（ctDNA）的高灵敏度绝对定量检测。旨在通过动态监测术后微小残留病灶（MRD），探索ctDNA浓度变化与肿瘤复发、转移的相关性。 2．（委托任务）的方式和要求： （1）技术路线： 基于外周血血浆样本，中标人需采用“广谱热点筛查”策略。中标人需针对结直肠癌最常见的高频突变位点（包括但不限于 KRAS G12/G13, NRAS, BRAF V600, APC 等）设计并合成特异性探针，对采购人样本进行多重ddPCR检测。 （2）检测原理： 中标人需利用微滴式数字PCR平台（如Bio-Rad QX200或同等性能设备），将样本DNA分割成数万个微滴进行独立扩增，实现单分子水平的绝对定量。 （3）灵敏度要求： 检测体系必须具备高特异性与高灵敏度，能够有效区分低频突变与背景噪音，检测下限（LOD）需在 0.01% - 0.1% 范围内突变等位基因频率（VAF）。 （4）样本类型： 静脉血血浆（保存温度≤-80℃）。 二、工作条件和协作事项： 1、采购人委托中标人进行收样及技术服务，需提供相关工作开展所需的技术数据和相关条件，经中标人确认采购人的技术体系满足灵敏度要求后，中标人开始提供技术服务。 （1）样本提供： 外周血血浆样本需使用无细胞DNA采血管（如Streck管）或EDTA抗凝管采集，并经双离心处理后保存于温度≤-80℃的环境中。 （2）临床信息： 采购人需向中标人提供详细的临床背景资料，包括：患者编号、采样时间点（如术前、术后、随访期）、治疗方案、影像学检查结果（CT/MRI）及病理诊断信息。 （3）合规性： 采购人承诺所样本及数据均已获得患者知情同意，符合伦理审查要求。 2、中标人开展相关技术服务工作所具备的条件包括：（实验设备、技术手段、***平台等） （1）硬件设施： 中标人需具备开展数字PCR实验的标准分子生物学实验室（PCR Clean Room），配备微滴生成仪、PCR扩增仪、微滴读取仪及相关数据分析软件。 （2）技术能力： 中标人需具备定制化ddPCR引物/探针设计能力、ctDNA提取能力及专业的生物信息学分析团队。 （3）预算执行： 中标人需根据采购人 19.1万元 的总预算，为采购人提供约 382个样本的检测服务（具体数量以最终结算为准），检测位点数由采购人指定。 （4）人员保障：中标人提供2名有相关专业背景专人负责样本收集，根据采购人通知2小时内到收样地点进行收样，当天完成样本前处理，收样周期1年。 三、验收/交付标准和方式： 1. 交付物清单： （1）原始数据文件： 包含所有样本的二维散点图（Amplitude vs. Droplet Number）及微滴计数统计表。检测仪器由中标人免费投放到采购人指定实验室，完成检测后仪器及相关检测数据要在采购人保留1年完成相关复验后方可撤离。 （2）分析结果表： 提供Excel/CSV格式的数据汇总表，包含以下核心指标： 突变位点名称（如 KRAS G12D） 突变绝对浓度（Concentration, copies/μL 或 copies/mL） 阴阳性判定结果 （3）结题报告：提供PDF格式的正式检测报告，包含实验方法、试剂耗材清单、质控结果及数据分析说明。 2. 验收标准： （1）数据质量： 阴性对照样本不得出现假阳性信号；阳性对照样本检测结果需与预期一致；单样本有效微滴数需大于总微滴数的80%。 （2）科研适用性： 交付的数据需经内部质控验证，确保数据的可靠性与一致性，能够清晰展示患者治疗前后的 ctDNA 浓度动态变化趋势。

质保期:验收合格之日起1年;质保服务:①质保期内因乙方原因导致数据/报告不符合合同约定验收标准（含质控失败、假阳性/假阴性、微滴数不足等），乙方无条件免费重测并重出报告；②质保期内配合甲方数据复核、答疑，2小时内响应技术咨询；③按合同要求保留原始数据及仪器在甲方现场至少1年供复验；④严格履行保密义务，样本剩余按要求返样;