芜湖市中医医院零采（2026）007DPP-4通过OPGRANKLRANK通路调控糖尿病骨质疏松骨代谢的作用机制研究项目技术服务询价公告

序号

服务内容

数量

单位

技术与质量要求

1

破骨细胞诱导培养与TRAP染色分析

3

次

细胞与诱导： 使用小鼠单核/巨噬细胞系RAW264.7。需提供重组小鼠M-CSF与RANKL，终浓度均为100 ng/mL。实验分组： 至少设立对照组、DPP4抑制剂干预组。建议设立溶剂对照组。染色要求： 严格按照TRAP染色试剂盒说明书操作，并于诱导第4天进行染色。结果交付： 提供高分辨率、全视野的TRAP染色数字化图片。对每样本计数不少于5个视野，统计含有≥3个细胞核的TRAP阳性细胞（即破骨细胞）数量，并提供每组的平均破骨细胞数及统计图。

2

细胞上清液OPG与sRANKL浓度ELISA检测

3

次

检测指标： 小鼠OPG、可溶性RANKL（sRANKL）。实验要求：- 使用经验证的小鼠特异性ELISA试剂盒。- 每样本设置2-3个技术复孔。- 标准曲线R²值需 > 0.99。- 设立阴性质控和阳性质控。结果要求：- 提供每份样本的绝对浓度值（pg/mL）。- 计算并提供各组的RANKL/OPG比值。

3

OPG中和实验验证

3

次

实验设计： 在破骨细胞诱导体系中，设立以下四组：对照组、DPP4抑制剂组、DPP4抑制剂+OPG中和抗体组、DPP4抑制剂+同型IgG对照组。抗体要求： OPG中和抗体及同型对照IgG需为高纯度、经功能验证的商业化产品，并提供厂家及货号。中和抗体浓度需经预实验优化（建议1-5 μg/mL）。检测与交付： 以TRAP染色及破骨细胞计数为终点检测指标。交付要求同服务内容1，并提供四组间的统计分析结果。

4

细胞RNA提取与实时荧光定量PCR（RT-qPCR）

3

次

检测基因： OPG, RANKL, RANK, DPP-4，及内参基因（GAPDH, β-Actin）。质量要求：- RNA浓度 ≥ 100 ng/μL，A260/A280比值在1.9 - 2.1之间。- 琼脂糖凝胶电泳显示清晰的28S/18S rRNA条带。qPCR要求：- 使用SYBR Green法，引物需经过特异性与扩增效率（90%-110%）验证。- 每样本设置3个技术重复，设立无模板对照。结果交付：- 提供扩增曲线、溶解曲线图及原始Ct值。- 使用2^(-ΔΔCt)法计算基因相对表达量，并提供分析后的数据。

5

数据分析与结题报告

1

项

统计分析：- 采用GraphPad Prism或SPSS软件进行数据分析。- 分析方法需包括：两组间比较（t检验）、多组间比较（单因素方差分析及事后检验）。报告要求：- 提供完整的结题报告，内容包括详细的实验方法、所有原始数据图表、统计分析结果与生物学结论。- 一并交付所有原始数据，包括图片、数据表格等。