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| 项目名称1 | Cre/Dre基因敲入小鼠制备 | 项目编号 | WLU-FW-KS-NM-****-**** | ||
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| 公示开始日期 | ****-**-** **:**:** | 公示截止日期 | ****-**-** **:**:** | ||
| 采购单位 | 西****学 点击查看 | 付款方式 | 内贸部分：货到验收合格后付全款 | ||
| 联系人 | 中标后在我参与的项目中查看 | 联系电话 | 中标后在我参与的项目中查看 | ||
| 到货时间要求 | 预算总价 | ￥ ***,*** | |||
| 收货地址 | |||||
| 供应商资质要求 |
符合《政府采购法》第二十二条规定的供应商基本条件 ; 被授权人社保缴纳证明 (近3个月) (必选) ; 法定代表人资格证明书 (联系人须与法定代表人一致)/投标授权委托书(联系人须与被授权人一致) (必选) |
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采购清单1
| 采购物品 | 采购数量 | 计量单位 | 所属分类 |
|---|---|---|---|
| Cre/Dre基因敲入小鼠制备 | ** | 个 |
| 品牌 | |||
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| 规格型号 | |||
| 预算 | ￥ **,*** | ||
| 技术参数 | 1.需求评估与方案设计 1)需求沟通：与客户深入对接核心需求，明确敲入目的（如基因功能验证、疾病模型构建、蛋白定位追踪）、目的片段信息（基因序列、标签类型、片段长度）、目标插入位点（特定基因内含子/外显子、安全位点如Rosa**、H**）、小鼠背景品系（C**BL/6、BALB/c、FVB等）、交付指标（阳性小鼠数量、基因型纯度）及项目周期要求。 2)方案设计与优化：结合客户需求，基于基因组数据库（如MGI）分析目标位点可行性，评估脱靶风险，选择最优基因编辑技术路线（优先CRISPR/Cas9，复杂位点可选用TALEN）；设计向导RNA（gRNA）、供体载体（Donor Vector，含同源臂、目的片段、筛选标记）及基因型鉴定方案；提供详细方案报告，含技术路线、预期效果、风险提示及优化建议，确认后启动项目。 2.供体载体构建与验证 1)载体骨架选择：根据敲入需求选择合适载体，如条件性敲入载体、定点整合载体、报告基因载体等，确保载体兼容性及目的片段表达稳定性。 2)目的片段克隆与载体组装：通过PCR扩增目的基因片段/标签序列，构建含同源臂（长度通常***-****bp，保证整合效率）、目的片段、筛选标记（如Neo、Puro，可选去除型元件）的供体载体。 3)载体验证：采用酶切鉴定、Sanger测序验证载体序列准确性，确保目的片段无突变、插入方向正确，同源臂与基因组目标区域完全匹配，无杂质污染后用于后续实验。 3.gRNA设计、合成与活性验证 1)gRNA设计：针对目标插入位点上下游序列，设计2-3条高特异性、高活性gRNA，避开重复序列及潜在脱靶位点，通过生物信息学工具（如CRISPOR）预测脱靶风险。 2)合成与体外活性验证：合成gRNA（化学合成或体外转录），与Cas9蛋白组装形成核糖核蛋白复合体（RNP）；通过体外切割实验验证gRNA活性，筛选切割效率最高的gRNA用于显微注射。 4.受精卵显微注射与胚胎移植 1)供体雌鼠超数排卵与受精卵收集：选取健康适龄供体小鼠，通过注射孕马血清促性腺激素（PMSG）和人绒毛膜促性腺激素（hCG）诱导超数排卵，与雄鼠合笼后收集受精卵，体外培养至合适阶段。 2)显微注射：将验证合格的RNP复合体与供体载体共同注射到受精卵的原核或细胞质中，确保注射量精准，减少胚胎损伤。 3)胚胎移植：挑选活力良好的注射后胚胎，移植到同步发情的代孕母鼠（假孕母鼠）输卵管或子宫内，饲养代孕母鼠至自然分娩，获得F0代小鼠。 5.子代小鼠基因型鉴定与筛选 1)样本采集：F0代小鼠出生后2-3周，采集尾尖组织提取基因组DNA。 2)基因型鉴定：采用PCR技术扩增目标插入区域，结合琼脂糖凝胶电泳初步筛选阳性个体；对阳性个体进行Sanger测序，验证目的片段是否精准插入、序列是否正确、无移码突变，同时检测是否存在脱靶效应（可选，针对高风险位点）。 3)阳性小鼠扩繁：筛选出基因型正确的F0代阳性小鼠，与野生型小鼠回交获得F1代小鼠，对F1代进行基因型鉴定，确认目的片段稳定遗传，建立杂合子小鼠种群；根据客户需求，进一步近交繁殖获得纯合子小鼠。 6.交付内容 1)因敲入小鼠：提供约定数量的F1代杂合子/纯合子阳性小鼠，附详细基因型鉴定报告，确保小鼠健康无特定病原体（SPF级），遗传背景清晰； 2)实验原始资料：含完整实验方案、gRNA序列及活性验证数据、供体载体图谱及测序报告、显微注射与胚胎移植记录、基因型鉴定电泳图及测序结果； 3)剩余试剂与载体：提供剩余的gRNA、Cas9蛋白、供体载体等试剂，方便客户后续实验； 4)技术文档：含小鼠饲养管理指南、基因型鉴定方法手册、后续扩繁与表型分析建议。 7.质量控制标准 1)载体质量：供体载体测序准确率***%，无目的片段突变、缺失或反向插入； 2)编辑效率：F0代小鼠阳性率不低于**%（CRISPR/Cas9技术），F1代稳定遗传率达**%以上； 3)基因型准确性：阳性小鼠经双重PCR验证及测序确认，目的片段精准插入目标位点，无额外碱基插入/缺失； 4)小鼠健康：交付小鼠均为SPF级，无发热、腹泻、发育迟缓等异常症状，体重符合对应品系正常范围； 5)脱靶控制：针对高风险项目，采用全基因组测序或靶向测序检测脱靶位点，确保无显著脱靶效应。 |
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| 售后服务 | 质保期:1年;商品承诺:质保期后，只收取零配件费，不收取人工费; | ||
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